Comment utiliser des résines de chromatographie d'échange d'ions?
1. Méthode de fonctionnement:
Étant donné que l'échantillon, le tampon et l'éluant de la séparation biochimique sont toutes des phases mobiles, elles peuvent être séparées lors de la circulation dans la colonne. Par conséquent, l'échange d'ions peut être effectué dans le fonctionnement de la colonne et la séparation sous forme chromatographique. Pendant le processus de séparation, les substances non-aadsorbées continuent de sortir du système de réaction, ce qui fait passer l'équilibre vers la droite en continu, qui est une sorte d'équilibre dynamique, il est donc également appelé fonctionnement dynamique. Le mode de fonctionnement dynamique a un bon effet de séparation, convient à toutes sortes d'échantillons et peut réaliser un fonctionnement continu. Dans le fonctionnement de la séparation chromatographique, la condition de chargement de la colonne chromatographique a une certaine influence sur la séparation. Les résines doivent être réparties uniformément dans la colonne, l'existence de bulles d'air n'est pas autorisée et la stratification des résines doit également être empêchée.
Pour certains échantillons avec une viscosité élevée, la méthode de traitement "statique " peut également être utilisée pour l'extraction et la séparation préliminaires. Les résines d'échange d'ions et le liquide de travail à traiter sont agitées dans le récipient de réaction. Lorsque l'équilibre d'adsorption est atteint, séparez les résines et les raffinés et chargez-les dans une colonne d'élution.
Cette méthode de fonctionnement par lots statique a un équipement de processus simple et un fonctionnement facile. Par exemple, la séparation préliminaire de certains produits naturels tels que l'héparine sodium adopte souvent cette méthode de séparation statique.
Dans le fonctionnement du mode de séparation statique, la vitesse d'agitation de l'échangeur d'ions dans le liquide de travail doit être correctement contrôlée. Si la vitesse d'agitation est trop rapide et que la force de cisaillement est trop grande, les particules d'échange d'ions seront brisées et il sera difficile de filtrer et de séparer; Si la vitesse est trop lente, elle affectera le contact entre les résines et le liquide de travail, et affectera également le taux de change.
2. L'impact de l'échantillon sur l'effet de séparation:
Afin d'atteindre une haute résolution et une capacité de charge élevée pour la séparation biochimique, la préparation et les performances de la solution de travail sont également des facteurs très importants. La viscosité et la clarté du liquide de travail affectent non seulement l'effet de séparation des résines d'échange d'ions, mais affectent également la durée de vie du milieu de séparation.
La séparation biochimique est souvent un système relativement complexe, dans lequel il existe de nombreux types d'impuretés, non seulement de petites molécules, mais aussi des substances colloïdales, des substances lipidiques, etc. ou bloquer les pores du milieu, provoquant une contamination irréversible et raccourcissant la durée de vie du milieu de séparation. Par conséquent, avant l'opération de séparation, le liquide de travail doit être correctement prétraité autant que possible pour assurer l'effet de séparation.
Dans le processus de séparation et de purification biochimiques, certains produits cibles sont enlevés par le processus d'élution, ou le produit cible est conservé sur le milieu en raison de l'élution incomplète, entraînant une perte de produit, ce qui est un facteur important affectant le rendement du produit.
Dans le même temps, les changements structurels de la protéine provoquent une inactivation, ce qui affectera également le rendement. L'ajout de stabilisateurs ou d'agents protecteurs dans le processus d'échange d'ions peut non seulement augmenter le rendement, mais également améliorer la sélectivité du milieu de séparation pour les protéines.
3. L'impact du débit sur l'effet de séparation:
Dans la chromatographie d'échange d'ions, le débit est un facteur important affectant l'effet de séparation. Afin d'obtenir un excellent effet de séparation, les expériences doivent être effectuées en fonction de facteurs tels que le type de résine d'échange d'ions, la taille des particules et la structure moléculaire des ingrédients actifs dans le liquide de travail pour établir de meilleurs paramètres expérimentaux.
Si le poids moléculaire du produit cible est relativement petit et que la taille des pores du milieu est relativement grande, un débit plus élevé peut être utilisé car il est propice au transfert de masse.
Cependant, lorsque le produit cible est une biomacromolécule et que la taille des pores du milieu est plus petite que celle de la molécule de substance séparée, un débit plus lent doit être adopté en raison du taux de diffusion plus lent de la molécule.
Lorsque la viscosité du fluide de travail est élevée, un débit inférieur doit également être utilisé en raison du taux de transfert de masse plus faible.
Le débit affecte non seulement l'effet de l'adsorption d'échange, mais affecte également l'effet de l'élution. Habituellement, le débit pendant l'élution est plus lent que celui de l'adsorption d'échange d'ions.
4. Les méthodes d'élution de la chromatographie d'échange d'ions:
Lorsque la protéine cible dans l'échantillon est complètement liée à l'échangeur d'ions, elle doit être éluée. Le principe de base consiste à utiliser un ion ou un groupe plus actif que la substance d'adsorption pour désorber le produit cible qui est échangé et adsorbé à la surface extérieure et à l'intérieur de la particule moyenne. Différentes protéines cibles ont des capacités de liaison différentes aux résines échangeuses d'ions. Par conséquent, un éluant approprié doit être sélectionné pour éluer la protéine du milieu et collecter les produits séparés et purifiés. Il existe environ trois méthodes d'élution pour la chromatographie d'échange d'ions:
1) Élution simultanée: l'éluant est la même substance, et l'acide dilué, la solution alcaline ou saline peuvent être utilisés, ou un solvant organique approprié peut être utilisé, parmi lequel la solution saline est la principale, et le choix est fait en fonction du Propriétés du produit cible et forme posologique du produit final.
Étant donné que les substances adsorbées ne sont souvent pas d'un seul type, les charges transportées par diverses substances sont différentes et que la résistance de liaison avec le milieu est différente. Même si le même éluant est utilisé, les substances facilement remplacées s'écoulent d'abord du milieu et la force de liaison sera plus forte. Une fois les substances qui coulent, tant qu'elles sont collectées par classification, diverses substances peuvent être séparées pour obtenir des produits relativement purs.
Cette méthode est principalement utilisée pour la séparation lorsque les propriétés du produit cible sont bien connues ou pour la séparation des types analytiques.
2) Élution par étapes: c'est-à-dire que l'élution est réalisée avec différentes concentrations de solutions de sel. Pendant le processus d'adsorption d'échange du milieu de séparation, diverses protéines sont adsorbées. Si une condition d'élution constante est utilisée, tous les composants ne peuvent parfois pas être correctement séparés et la condition d'élution doit être modifiée.
Le changement peut être un changement mis en scène, ce qui signifie que différents éluants ou éluants avec différentes valeurs de pH sont sélectionnés pour l'élution aux stades, et différents pics d'élution peuvent être obtenus en fonction de différentes concentrations et différentes acidités de l'éluant. Autrement dit, un type de concentration en sel peut obtenir une sorte de protéine cible, et une concentration différente de sel peut obtenir différentes protéines cibles.
Cette méthode d'élution étape par étape convient à la séparation des protéines avec des propriétés connues, en particulier pour la production à grande échelle, et est facile à utiliser et à contrôler.
3) Élution du gradient, c'est-à-dire en modifiant la force ionique ou la valeur de pH de l'éluant en fonction d'un certain changement linéaire (généralement uniquement dans les cas spéciaux, la méthode d'élution pour modifier la valeur de pH est utilisée). Pendant le changement progressif de l'éluant, différentes protéines peuvent être remplacées par une, et divers composants protéiques peuvent être obtenus.
Dans le même temps, les protéines ne sont généralement pas que la queue. L'élution du gradient est la méthode d'élution la plus couramment utilisée dans la chromatographie d'échange d'ions, et c'est aussi la méthode d'élution avec la plus forte capacité d'élution, qui convient à l'élution des composants avec des propriétés de charge similaires.
Dans le processus d'élution, l'élution de co-courant ou l'élution contre-courante peuvent être utilisées. Dans l'élution du co-courant, la direction d'écoulement de l'éluant est la même que celle du liquide de travail. Dans l'élution contre-courante, ou l'élution inverse, la direction d'écoulement de l'éluant est opposée à celle de la solution de travail.
Si le liquide d'alimentation est échangé et adsorbé à travers la colonne d'échange de haut en bas, la concentration de l'adsorbat dans la couche supérieure de la colonne d'échange est plus élevée que celle de la couche inférieure, et la désorption inverse de l'éluant de bas en haut peut atteindre le but de l'élution plus efficacement. Cependant, comme le fonctionnement de l'élution inverse est beaucoup plus compliqué que celui de l'élution du co-courant, l'élution du co-courant est principalement utilisée maintenant.
Désinfection des résines de chromatographie d'échange d'ions:
Dans le processus de préparation de certains produits biochimiques ayant des besoins de haute pureté, il est souvent nécessaire de stériliser les milieux de séparation pour prévenir les impuretés telles que les micro-organismes de se mélanger dans le produit cible.
La désinfection à haute température est la méthode la plus couramment utilisée. À l'heure actuelle, la plupart des échangeurs d'ions ont des propriétés physiques et chimiques stables et peuvent être soumis à une désinfection à haute température. Cependant, lorsque vous utilisez des milieux de polysaccharide, il faut noter que le support doit être dans le type de sel et que la désinfection à haute température doit être effectuée dans des conditions neutres, sinon cela entraînera la dégradation de la matrice macromoléculaire polysaccharide, qui, qui sera sérieusement affecter la durée de vie des médias.
NaOH est également un bon désinfectant. Cependant, la concentration appropriée de NaOH doit être sélectionnée en fonction de la résistance alcaline du milieu et du type et du degré de contamination microbienne. Lorsque vous utilisez la désinfection de NaOH, le trempage des colonnes peut également être utilisé, c'est-à-dire passer une certaine concentration de NaOH dans la colonne, fermer la soupape de sortie liquide et tremper pendant plusieurs heures pour atteindre le but de la désinfection. Si NaOH est utilisé en combinaison avec de l'éthanol, de meilleurs résultats peuvent être obtenus. Lors de l'utilisation de la désinfection de NaOH, la désinfection et le CIP peuvent être combinés.
Stockage des résines de chromatographie d'échange d'ions:
Toutes sortes de résines de chromatographie doivent être nettoyées avant le stockage après utilisation. Ceci est particulièrement important pour les milieux de séparation des polysaccharides.
Une fois le support de séparation utilisé, lavez-le avec 2 cV d'eau, puis traversez la colonne avec des volumes de 2 lits de 20% d'éthanol. Pour les milieux cationiques fortement acides, lavez avec une solution d'éthanol à 20% contenant 0,2 mol / L d'acétate de sodium, puis lavez avec une solution d'eau éthanol dégazée à un débit plus lent.
Après le traitement, il peut être stocké à température ambiante ou à 4-8 ° C pendant longtemps. La colonne chromatographique doit être complètement scellée pendant le stockage pour empêcher la volatilisation de l'humidité et la colonne sèche.
Le milieu qui n'est pas utilisé pour le moment doit être stocké dans une solution d'éthanol à 20%. Tous les milieux de séparation des échanges d'ions doivent être stockés à 4 ° C à 30 ° C et protégés contre le gel.
Le processus de séparation et de purification des macromolécules biologiques par chromatographie d'échange d'ions est principalement basé sur la dissociation de diverses molécules, la charge nette des ions et la différence électrique dans la distribution de charge de surface pour la séparation sélective. Il est devenu l'une des techniques de purification les plus fréquemment utilisées dans la séparation et la purification des produits biochimiques, protéines, peptides et autres substances.
Résines de chromatographie d'échange d'ions à base de dextran Seplife®:
Les résines de chromatographie d'échange d'ions Seplife® Dextran utilisent la matrice dextrane de la gel de gel de gel de gel de gel (Seprife G-25 et Seprife G-50), et les ligands fonctionnels d'échange d'ions de différentes propriétés sont ferme .
Les résines d'échange d'ions de dextrane sont généralement stockées sous la forme de poudre sèche, qui doivent être enflées avant utilisation. Il est largement utilisé dans les protéines de faible poids moléculaire telles que la prothrombine et l'héparine à faible poids moléculaire.
Sunresin S Résines de chromatographie sur l'échange d'ions de Dextran:
DEAE SEPLIFE® A25 / A50
Q Seplife® A25 / A50
CM SEPLIFE® C25 / C50
Sp Seplife® C25 / C50
SEPLIFIE® Ultra-rapide à flux d'agarose à base d'agarose Chromatographie Résines (BB):
Cette série de résines de chromatographie sur l'échange d'ions Seplife® est préparée par liaison de ligands d'échange d'ions à des microsphères d'agarose avec une taille de particules de 100-300UM. La pression du dos est relativement faible au débit. Pour les échantillons avec une viscosité et une turbidité élevées, l'utilisation de cette série de résines peut améliorer l'efficacité.
Sunresin S Resines de chromatographie d'échange d'agarose d'agarose ultra-rapide:
Deae Seplife® BB
Q Seplife® BB
CM Seplife® BB
SP Seplife® BB
Seplife® Résines de chromatographie d'échange d'ions à débit rapide à débit (FF):
Cette série de seplife® Les résines utilisent des microsphères d'agarose 45-165um comme matrice, liaison avec différents groupes fonctionnels. La plage de taille des particules appropriée lui permet d'avoir une plage d'applications plus large. Il est largement utilisé à divers stades de capture, de purification intermédiaire et de polissage des produits biologiques.
Sunresin Résines de chromatographie d'échange d'agarose à flux rapide:
Deae Seplife® FF
Q Seplife® FF
CM Seplife® FF
SP Seplife® FF
Seplife® Résines de chromatographie sur les échanges d'ions à haute résolution (HP):
Cette série Ses 25-45um d'agarose microsphères comme matrice et est préparée en liant différents groupes fonctionnels.
La petite taille des particules permet aux résines d'avoir une résolution plus élevée, et elle est largement utilisée dans la séparation fine et la préparation de petits échantillons.
Sunresin S Resins chromatographie d'échange d'agarose à haute résolution:
Deae Seplife® HP
Q Seplife® HP
CM Seplife® HP
SP Seplife® HP
Résines de chromatographie d'échange d'ions à haute capacité (XL):
La conception spéciale "tentacule " sur les microsphères d'agarose réduit l'influence de l'obstacle stérique lors de la liaison aux biomolécules, et les ligands sont plus raisonnablement distribués, ce qui lui donne une charge ultra-élevée et très rentable.
Sunresin S Résines de chromatographie d'échange d'agarose à grande capacité:
Deae Seplife® Xl
Q Seplife® Xl
CM Seplife® Xl
SP Seplife® Xl
Seplife® Résines de chromatographie d'échange d'ions à rigidité élevée (grande échelle):
Le milieu d'échange d'agarose à haute rigidité (à grande échelle) de [T0]} a une résistance à la pression maximale de 0,5 MPa, un débit maximal de 1000 cm / h et un taux de transfert de masse plus rapide, permettant une efficacité significative pour une efficacité pour l'efficacité pour production à grande échelle.
Selon la taille des particules de la matrice, le milieu d'échange d'agarose de rigidité élevé de {T0]} est divisé en rigidité élevée + milieu d'écoulement élevé (grande échelle) et rigidité élevée + milieu à haute résolution (HP à grande échelle).
Sunresin S High Rimidity Agarose Ion Exchange Chromatography Resins (grande échelle):
Deae à grande échelle / HP
Q à grande échelle / HP
CM à grande échelle / HP
SP à grande échelle / HP
Seplife® Taille uniforme de la taille des particules en polystyrène Échange de résines chromatographies (LXMS):
Les résines de chromatographie d'échange d'ions SEPLIFE® IEX LXMS fournissent deux types de tailles de pores (50 nm, 150 nm) et trois tailles de particules (15, 30 et 50um) de résines de taille de particules uniformes en polystyrène. Ses propriétés de réticulation élevées permettent aux résines de résister à une pression de fonctionnement plus élevée (3MPA).
Les deux tailles de pores de 50 nm et 150 nm couvrent l'application de la capture, de la purification intermédiaire et de la purification fine des anticorps, des protéines, des peptides, des acides nucléiques, des antibiotiques, des produits naturels et d'autres produits avec différents poids moléculaires.
Sunresin S Taille uniforme Taille des particules Polystyrène Échange de chromatographie Résines:
Seplife® LXMS 15Q / 15S (taille des particules 15UM, taille des pores 50 nm)
Seplife® LXMS 30Q / 30S (taille des particules 30UM, taille des pores 50 nm)
Seplife® LXMS 50Q / 50S (taille des particules 50UM, taille des pores 100 nm)
Seplife® LXMS 50HQ / 50HS (taille des particules 50UM, taille des pores 150 nm)
Seplife® Résines de chromatographie d'échange d'ions polyméthylacrylates (LXPM):
Ce groupe de résines de chromatographie d'échange d'ions est des microsphères avec du polyméthacrylate comme matrice en utilisant la technologie de synthèse polymère unique de Sunresin. Les microsphères sont modifiées par une technologie précise de fabrication de pores et des macromolécules hydrophiles à chaîne à longue chaîne de surface et sont couplés à différents groupes d'échange d'ions.
En raison de sa bonne hydrophilie, de sa bonne stabilité chimique et physique et de sa structure rigide, les résines de chromatographie d'échange d'ions ont une bonne biocompatibilité et une bonne durée de vie et améliorer l'efficacité de la purification. Ils couvrent l'application des étapes de production et de purification telles que la capture, la purification intermédiaire et la purification fine des molécules telles que les antibodies, les protéines, les peptides, les acides nucléiques, les antibiotiques et les produits naturels, et offre aux clients une solution globale pour la production industrielle de échantillons biologiques.
Sunresin S Résines chromatographies d'échange d'ions en polyméthylacrylate:
Seplife® LXPM CM / DEAE / SP / Q 650M (Hydrophilicité forte, taille des particules 80UM）
Seplife® LXPM CM / DEAE / SP / Q 650S (forte hydrophilicité, taille des particules 50um）
Seplife® LXPM CM / DEAE / SP / Q 706 (Hydrophobicité forte ， Multimodale ionique forte, taille des particules 80UM）
Seplife® LXPM CM / DEAE / SP / Q 5504 （Hydrophobicité forte ， Haute résolution, forte multimodale ionique, taille des particules 80UM)
Pour plus d'informations sur les différents types de résines de chromatographie d'échange d'ions, veuillez nous contacter à (info.lifescience @ sunresin. Com).
Français
Sunresin Park, No.135, jinye Road, Xi’an Hi-tech Industrial Development Zone, Shaanxi-710076, Chine 
Envoyez-nous un email:
Appelez-nous au: