Résine de chromatographie d'agarose
Cm seplife ff
CM SEPLIFE® FF Agarose Chromatographie Profil de produit en résine:
Le milieu de chromatographie CM Seplife® FF est un nouveau type de milieu de chromatographie d'agarose hautement réticulé indépendamment développé par Sunresin. Il s'agit d'un cation faible formé par des groupes de carboxyméthyle de liaison au milieu de chromatographie sur la filtration du gel d'agarose. Médias de chromatographie d'échange d'ions. Il a un débit élevé, une basse pression de dos, une charge dynamique élevée, une bonne stabilité chimique et des propriétés mécaniques, une faible adsorption non spécifique, un taux de récupération élevé, une mise à l'échelle facile, peut raccourcir le temps de production et améliorer l'efficacité de la production. Largement utilisé dans purification de chromatographie sur l'échange d'ions de protéines en aval, acides nucléiques et peptides dans biopharmaceuticals et bio-ingénierie.
CM SEPLIFE® FF Agarose Chromatographie Paramètres de résine:
| Code de résine | CM Seplife® FF |
| Apparence | Perles de sphère blanche |
| La taille des particules(μm) | 45 ~ 165 |
| Matrice | Seplife 6ff |
| Débit (cm / h) | <750 |
| Pression (MPA) | 0.3 |
| Résistance à la chaleur | 121 ℃, dans l'eau pendant 30 minutes |
| stabilité du pH | 4 ~ 13 (à long terme), 3 ~ 14 (court terme, CIP) |
| Application | Protéines, acides nucléiques et peptides en aval
des biopharmaceutiques et de la bio-ingénierie |
| Stabilité chimique | ÉTABLE dans les liquides suivants: tous les tampons aqueux communs; 1 mol / L d'hydroxyde de sodium; 8 mol / L urée; Chlorhydrate de guanidine 8 mol / L;
70% d'éthanol |
| Adsorption (mg / ml) | 60 mg / ml de lysozyme / ml |
| Capacité d'échange d'ions | 0,09 ～ 0,13 mmol / ml |
| Temp. | 4 ~ 40 ℃ |
Conditions de test: Colonne de chromatographie 16 mm * 300 mm; Hauteur de lit de colonne 15 cm; température 25 ℃;
La phase mobile était de 0,1 mol / L NaCl. |
CM SEPLIFE® FF Agarose Chromatographie Instruction de test de résine:
1. Emballage de colonne
Opération d'emballage conformément aux procédures opérationnelles standard. Il faut s'assurer que chaque matériau est à température de travail et que le gel doit être dégazé avant l'emballage.
2.Bessage
Équilibrez la colonne avec 2 à 5 fois le volume de lit de la solution de balance de chargement. Assurez-vous que la conductivité et le pH de l'effluent sont exactement les mêmes que la conductivité et le pH du tampon de chargement. La solution d'équilibre est une solution de tampon à faible concentration, comme le Tris, le PBS, etc.
3.La chargement
(1) L'échantillon est préparé avec la solution d'équilibre, et l'échantillon trouble doit être centrifugé et filtré avant le chargement. Des échantillons avec trop de concentration en sel sont préparés après le traitement.
(2) Généralement, le produit cible est lié à la colonne, les impuretés sont emportées avec la solution d'équilibration, puis l'éluant est sélectionné pour laver le produit cible.
(3) Le degré auquel le milieu adsorbe les composants de l'échantillon dépend des propriétés chargées de l'échantillon, de la résistance ionique de la phase mobile et de la valeur de pH. La concentration en sel est petite et le milieu adsorbe les composants de l'échantillon plus fermement. Lorsque vous utilisez des supports de chromatographie CM, la valeur de pH recommandée est 1 unité supérieure au point isoélectrique du produit cible.
4. Élution
Augmentez la concentration de sel ou augmentez la valeur du pH pour l'élution, couramment utilisée pour augmenter la concentration de sel.
5.
Généralement, lavez d'abord avec un tampon de concentration à sel élevé (contenant 1 ~ 2 mol / L de NaCl) ou réduisez le pH de plus de 10 fois le volume de colonne, puis lavez à l'équilibre avec la solution d'équilibre lors de la protéine de liaison.
S'il y a des protéines ou des lipides inactivés qui ne peuvent pas être emportés pendant la régénération, ils peuvent être éliminés avec CIP.
6.Cianing en place
(1) Pour la protéine liée par la liaison ionique, il peut être éliminé de 0,5 ~ 1 fois le volume de lit de 2M NaCl.
(2) Pour les protéines précipitées, les protéines ou les lipides liés hydrophobiquement, vous pouvez d'abord rincer avec un volume de lit de 1 m de NaOH 0,1 m, puis vous laver avec une solution de tampon d'équilibre jusqu'à ce que le pH soit neutre.
(3) Pour les protéines et les lipides avec une forte liaison hydrophobe, lavez avec 4 à 10 fois le volume de lit de 70% d'éthanol ou 30% d'alcool isopropylique. Il convient de noter que la concentration de solvant organique augmente progressivement de manière gradient, sinon il est généré que des bulles faciles sont générées.
7.
Scellé et stocké à 4 ~ 30 ℃ (la solution de préservation est de 20% d'éthanol) dans un endroit sec, ventilé et propre et ne peut pas être congelé; Les colonnes utilisées sont stockées à 4 ~ 8 ℃, une solution d'éthanol à 20%.
8. Transport
Évitez la lumière du soleil, la pluie et la forte pression pendant le transport, et il est strictement interdit de transporter avec des matériaux toxiques et nocifs.
CM SEPLIFE® FF Agarose Chromatographie Resin Matters nécessitant une attention:
(1) Sélection de la colonne: En théorie, tant que la colonne est suffisamment longue, vous pouvez obtenir la résolution idéale, mais parce que le débit de colonne est lié au gradient de pression, l'augmentation de la longueur de la colonne rend le débit plus lent, le pic élargit et diminue la résolution; Le diamètre de la colonne augmente, de sorte que l'inégalité de l'écoulement liquide augmente et que la résolution diminue de manière significative. UN
(2) Le pH et la force ionique du tampon d'élution doivent être strictement contrôlés pendant le processus de purification. Le milieu de chromatographie échantillon et CM doit être complètement équilibré avec un tampon d'élution avant la chromatographie de la colonne. UN
(3) Le lit de colonne installé doit être plat et exempt de canaux et de bulles, sinon il doit être réinstallé.
(4) Le débit doit être strictement contrôlé pendant l'élution et pas trop rapidement.
(5) Le volume de l'échantillon doit être faible et la concentration ne doit pas être trop élevée.
(6) Empêcher le cylindre de sécher pendant l'addition d'échantillon et l'ensemble du processus d'élution.
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