Nickel Chelating Agarose Chromatographie Résine
Instructions Ni Seplife 6ff (IDA)
Ni Seplife® 6FF (IDA) Profil de produit multimédia chromatographique Affinity:
Ni chromatographie sur l'agarose (IDA) est de lier l'acide iminodiacique sur des milieux d'agarose 6FF, puis l'ion chélatant de Ni2 + être comme un Médias chromatographiques d'affinité. Il est largement utilisé pour le traitement des protéines, acide nucléique et purification des polypeptides en bas de biopharming et bio-ingénierie.
Ni Seplife® 6FF (IDA) Affinité Chromatographic Media Resin Paramètres:
| Code de résine | Ni Seplife® 6ff (Ida) |
| Apparence | Perles de gel de sphère |
| Taille des particules (μm) | 45 ～ 165 |
| Matrice | Seplife 6ff |
| Débit (cm / h) | ≥370 |
| Pression (MPA) | 0.3 |
| Capacité de liaison ionique | (Ni2 + umol / ml): ~ 15 |
| Référentiel du débit linéaire | 60 cm / h |
| stabilité du pH | 3 ~ 13 (à long terme), 2 ~ 14 (court terme, CIP) |
| Application | Purification des protéines His-Tag |
| Stabilité chimique | Stable dans une solution de tampon d'eau, 0,1 mol / L NaOH; 0,01 mol / L HCl;
8 mols / L de carbamide |
Ni Seplife® 6FF (IDA) Affinité CHROMATOGRAPHIE Médias Test Instruction:
1. Emballage de colonne
(1) Tout le matériau et le réactif à température ambiante, préparant le tampon initial et l'élution Beffer.
(2) Prenez un échantillon de résine selon la taille de la colonne, lavez 20% d'éthanol pour sécher, utilisez du tampon (le rapport de la résine: tampon = 3: 1) pour transformer l'homogénat et dégazer le traitement.
(3) Utilisez de l'eau ou du tampon pour garder à l'intérieur ou au fond de la colonne humide, l'eau ou le tampon doit être plus élevé que le filtre mambrane et assurez-vous que le fond de la colonne sans bobble.
(4) Utilisez une tige de verre pour guider l'homogénat dans la colonne avec une face interne de la colonne une fois pour éviter toute bulle. Ouvrez la vanne de sortie de colonne pour effectuer le réglage de la résine librement et connecter bien le capuchon de la colonne.
(5) Pompe péristaltique ouverte, utilisez du tampon pour passer à travers la colonne à un débit de 1,33 fois que le débit de tampon normal en utilisant. Utilisez le tampon 2-3BV pour faire de l'équilibre des colonnes.
2. Equilibre
Équilibre avec 2 ~ 5 lits de volumes de solution tampon initiale jusqu'à ce que la conductivité, le pH et d'autres paramètres soient inchangés.
3. Échantillon de chargement
(1) L'échantillon est généralement dissous dans le tampon initial de pH 6-8, et l'augmentation du pH du tampon de charge peut augmenter la charge.
(2) Le tampon ne doit pas contenir d'EDTA et de citrate, et il est préférable d'éviter de réduire les agents tels que le mercaptoéthanol et le DTT.
(3) La solution de tampon couramment utilisée a une solution tampon de phosphate de sodium de 10 à 100 mmol / L, une solution tampon de 20 à 200 mmol / LTRIS-HCl.
(4) 0,15 à 0,5 mol / L de NaCl est généralement ajouté au tampon pour éliminer l'échange d'ions.
(5) Lorsque vous utilisez un gel d'agarose de chélate de nickel pour la première fois, il est recommandé d'utiliser 50 mmol / L de PBS (50 mmol / L NAH2PO4, 0,5 mol / L NaCl, pH 7,4) comme tampon initial.
4. Élution
L'élution est généralement divisée en les méthodes suivantes:
(1) Réduire l'élution du pH: la plupart des protéines seront éluées à pH 6-4 (également à pH 3-4), et le tampon peut être des systèmes de tampon de l'acétate de sodium, d'acide citrique et de phosphate.
(2) Élution concurrentielle: augmentant ou augmentant linéairement la concentration de substances concurrentes avec une affinité avec les ions métalliques (par exemple 0-0,5 mol / L imidazole, 0-50 mmol / L d'histidine, 0-2 mol / L NH4CL).
(3) Élution de l'agent chélatant: les agents chélateurs tels que l'EDTA et l'EGTA peuvent réagir avec les ions métalliques pour provoquer l'élimination de la protéine. Cependant, cette méthode ne peut pas séparer différentes protéines et affecte l'adsorption des protéines, entraînant l'incapacité de la protéine de fusion à suspendre.
Ni Seplife® 6FF (IDA) Remarques des médias chromatographiques Affinity:
(1) Lorsque vous utilisez pour la première fois, si la concentration d'imidazole requise pour l'élution est incertaine, il est recommandé d'ajouter 10 mmol / l, 20 mmol / L, 50 mmol / L, 100 mmol / L, 200 mmol / L, 500 mmol / L à le tampon initial. L'imidazole a été élué et collecté de faible à élevé, respectivement, et les résultats élués ont été identifiés par électrophorèse SDS-PAGE.
(2) L'imidazole est alcalin et le pH est ajusté avec HCl après la préparation du tampon correspondant.
(3) La baisse de l'élution du pH et l'élution de l'agent chélatant entraîneront la chute des ions métalliques, et les ions métalliques doivent être repensés avant la prochaine utilisation.
(4) Conditionnellement, une élution linéaire du gradient d'imidazole peut être effectuée pour déterminer les conditions d'élution préférées.
Pour les méthodes d'élution ci-dessus, 150 à 500 mmol / L de NaCl doivent être ajoutés au tampon pour éliminer l'échange d'ions.
5.
(1) Le gel doit être déniné et régénéré après une utilisation répétée ou lorsqu'il est nécessaire de remplacer les ions métalliques chélés. Méthode d'élimination du nickel: Tout d'abord, rincez la colonne avec des volumes d'eau distillée de 5 à 10 lits, puis rincez la colonne avec des volumes de 5 à 10 lits de 100 mmol / L EDTA, et enfin utiliser des volumes de 2 à 3 lits de lavages NaCl 0,5 mol / L EDTA résiduel à l'extérieur.
(2) La colonne utilisée plusieurs fois doit généralement être nettoyée après le retrait du nickel. Méthode de nettoyage: Inversez la colonne avec 0,1 ~ 1,0 mol / L de NaOH, gardez-la à 50 cm / h pendant 1 ~ 2 h, non seulement peut éliminer les impuretés fortes, mais également éliminer la source de chaleur.
(3) repeindre les ions métalliques après le nettoyage. Méthode de chélation: Premièrement, la colonne après l'élimination du nickel est entièrement équilibrée avec des volumes de 2 à 5 lits d'eau distillée, puis de 0,1 à 0,3 mol / L de solution de sel en métal est utilisée pour passer des volumes de 5 à 10 lits pour chélater les ions métalliques. Rincez avec des volumes de 5 à 10 lits d'eau distillée pour éliminer les ions métalliques non vérifiés.
6. CIP
(1) L'élimination des protéines adsorbées par échange d'ions: les volumes de 2 à 3 lits ont été lavés par une solution de NaCl 2 mol / L.
(2) L'élimination de fortes protéines hydrophobes et lipides, etc .: 4 volumes de lit ont été lavés avec 70% d'éthanol ou 30% d'isopropanol.
(3) Élimination de la protéine précipitée, protéine hydrophobe: étape de régénération du gel de référence.
7.
Scellé et stocké à 4 ~ 30 ° C (20% d'éthanol en solution de stockage), sec, ventilé, propre, pas congelé; Les colonnes utilisées sont stockées dans une solution d'éthanol de 4 ~ 8 ° C, 20%.
Avertir:
(1) l'échantillon et le NI Seplife®6ff (IDA) doivent être équilibré avec le tampon d'élution puis allez dans la colonne de chromatographie.
(2) Le lit de colonne doit être plat, exempt de rainures et de bulles d'air, sinon elle doit être réinstallée.
(3) Lors de l'utilisation, assurez-vous que la température de la colonne et du tampon est la même, en évitant la génération de bulles dans le lit de la colonne et en affectant l'effet de purification.
(4) Le débit doit être strictement contrôlé pendant le processus d'élution, et pas trop rapidement.
(5) Pendant le chargement et l'ensemble du processus d'élution, la surface du cylindre est empêchée de sécher.
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