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Ni Seplife® 6FF (NTA)

Traitement de la purification des protéines, des acides nucléiques et des polypeptides
Description du produit

Résine de chromatographie d'agarose chélatant le nickel

Ni Seplife 6FF (NTA)

Profil de produit:
Chromatographie sur agarose de chélation Ni(NTA) lie l'acide iminodiacétique sur un milieu d'agarose 6FF, puis chélate l'ion de Ni2 + pour être comme unsupports chromatographiques d'affinité. Il est largement utilisé pour letraitement des protéines,acide nucléiqueetpurification de polypeptideen aval debiopharming et bio-ingénierie.

20200804083655

Paramètres de résine:

Code résine Ni Seplife® 6FF (NTA)
Apparence Perles de gel sphérique
Taille des particules (μm) 45 ~ 165
Matrice Seplife 6FF
Débit (cm / h) ≥370
Pression (MPa) 0.3
Capacité de liaison ionique (Ni2 + umol / ml): ~ 15
stabilité du pH 3 ~ 13 (long terme), 2 ~ 14 (court terme, CIP)
Application Purification des protéines His-tag
Stabilité chimique Stable dans une solution tampon aqueuse, NaOH 0,1 M; 0,01 M HCl; 8 M Urée


Instruction de test:
1. emballage de colonne
Tout le matériel et le réactif à température ambiante, préparation du tampon initial et élution beffer.
2. équilibre
Équilibrez avec 2 ~ 5 volumes de lit de solution tampon initiale jusqu'à ce que la conductivité, le pH et les autres paramètres restent inchangés.
3. chargement de l'échantillon
(1) L'échantillon est généralement dissous dans le tampon initial de pH 6-8, et l'augmentation du pH du tampon de chargement peut augmenter la charge.
(2) Le tampon ne doit pas contenir d'EDTA et de citrate et il est préférable d'éviter les agents réducteurs tels que le mercaptoéthanol et le DTT.
(3) La solution tampon couramment utilisée contient 10 à 100 mmol / L de solution tampon phosphate de sodium, 20 à 200 mmol / solution tampon LTris-HCl.
(4) 0,15 à 0,5 mol / L de NaCl est généralement ajouté au tampon pour éliminer l'échange d'ions.
(5) Lors de la première utilisation d'un gel d'agarose chélate de nickel, il est recommandé d'utiliser 50 mmol / L PBS (50 mmol / L NaH2PO4, 0,5 mol / L NaCl, pH 7,4) comme tampon initial.
4. élution
L'élution est généralement divisée selon les méthodes suivantes:
(1) Réduire l'élution du pH: la plupart des protéines seront éluées à pH 6-4 (également à pH 3-4), et le tampon peut être des systèmes tampons d'acétate de sodium, d'acide citrique et de phosphate.
(2) Élution compétitive: augmentation ou augmentation linéaire de la concentration de substances concurrentes ayant une affinité pour les ions métalliques (par exemple 0-0,5 mol / L d'imidazole, 0-50 mmol / L d'histidine, 0-2 mol / L de NH4Cl).
(3) Élution d'agent chélateur: les agents chélateurs tels que l'EDTA et l'EGTA peuvent réagir avec les ions métalliques pour provoquer l'élution de la protéine. Cependant, cette méthode ne peut pas séparer différentes protéines et affecte l'adsorption des protéines, entraînant l'incapacité de la protéine de fusion à se bloquer.
Remarques:
(1) Lors de la première utilisation, si la concentration d'imidazole requise pour l'élution est incertaine, il est recommandé d'ajouter 10 mmol / L, 20 mmol / L, 50 mmol / L, 100 mmol / L, 200 mmol / L, 500 mmol / L à le tampon initial. L'imidazole a été élue et collectée de faible à élevé, respectivement, et les résultats élués ont été identifiés par électrophorèse SDS-PAGE.
(2) L'imidazole est alcalin et le pH est ajusté avec HCl après la préparation du tampon correspondant.
(3) L'abaissement du pH d'élution et l'élution de l'agent chélatant entraîneront la chute des ions métalliques et les ions métalliques devront être re-chélatés avant la prochaine utilisation.
(4) Conditionnellement, une élution linéaire en gradient d'imidazole peut être effectuée pour déterminer les conditions d'élution préférées.
Pour les méthodes d'élution ci-dessus, 150 à 500 mmol / L de NaCl doivent être ajoutés au tampon pour éliminer l'échange d'ions.
5. régénération
(1) Le gel doit être déniqué et régénéré après une utilisation répétée ou lorsqu'il est nécessaire de remplacer les ions métalliques chélatés. Méthode d'élimination du nickel: d'abord rincer la colonne avec 5 à 10 volumes de lit d'eau distillée, puis rincer la colonne avec 5 à 10 volumes de lit de 100 mmol / L EDTA, et enfin utiliser 2 à 3 volumes de lit de 0,5 mol / L de lavages NaCl loin de l'EDTA résiduel.
(2) La colonne utilisée plusieurs fois doit généralement être nettoyée après l'élimination du nickel. Méthode de nettoyage: Inversez la colonne avec 0,1 ~ 1,0 mol / L de NaOH, maintenez-la à 50 cm / h pendant 1 ~ 2 h, non seulement peut éliminer les impuretés fortes, mais également supprimer la source de chaleur.
(3) Re-chélation des ions métalliques après le nettoyage. Méthode de chélation: tout d'abord, la colonne après élimination du nickel est complètement équilibrée avec 2 à 5 volumes de lit d'eau distillée, puis 0,1 à 0,3 mol / L de solution de sel métallique est utilisée pour faire passer 5 à 10 volumes de lit pour chélater les ions métalliques. Rincer avec 5 à 10 volumes de lit d'eau distillée pour éliminer les ions métalliques non chélatés.
6.CIP
(1) Élimination des protéines adsorbées par échange d'ions: 2 à 3 volumes de lit ont été lavés par une solution de NaCl à 2 mol / L.
(2) Élimination des protéines et des lipides hydrophobes forts, etc.: 4 volumes de lit ont été lavés avec 70% d'éthanol ou 30% d'isopropanol.
(3) Élimination de la protéine précipitée, protéine hydrophobe: étape de régénération du gel de référence.
7. stockage
Scellé et stocké à 4 ~ 30 ° C (20% d'éthanol dans la solution de stockage), sec, ventilé, propre, non congelé; les colonnes utilisées sont stockées dans une solution d'éthanol à 4 ~ 8 ° C à 20%.


Mise en garde:
(1) L'échantillon et Ni seplife®6FF (NTA) doivent être équilibrés avec le tampon d'élution, puis aller dans la colonne de chromatographie.
(2) Le lit de la colonne doit être plat, exempt de rainures et de bulles d'air, sinon il doit être réinstallé.
(3) Lors de l'utilisation, assurez-vous que la température de la colonne et du tampon sont les mêmes, évitant la génération de bulles dans le lit de la colonne et affectant l'effet de purification.
(4) Le débit doit être strictement contrôlé pendant le processus d'élution, et pas trop rapide.
(5) Pendant le chargement et tout le processus d'élution, la surface du cylindre ne peut pas sécher.

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