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SP Seplife® FF

Matrice d'agarose, groupe SP, débit rapide, équivalent à SP Sepharose FF
Description du produit

Résine de chromatographie d'agarose

SP seplife FF

Profil de produit:
SP seplife® FFrésine de chromatographieest un nouveaurésine de chromatographie d'agarosedéveloppé indépendamment par Sunresin. C'est une sorte de propyle à base d'acide sulfonique lié surrésine de chromatographie de filtration sur gel d'agarose. Résine de chromatographie échangeuse de cations forte avec débit élevé, faible contre-pression, charge dynamique élevée, bonne stabilité chimique et propriétés mécaniques, faible adsorption non spécifique, taux de récupération élevé, mise à l'échelle pratique, raccourcissement du temps de production et amélioration de la productivité. Il est largement utilisé dansséparation par échange d'ions des protéines,acides nucléiquesetpeptidesen aval deproduits biopharmaceutiques et bio-ingénierie.

Paramètres de résine:

Code résineSP Seplife® FF
ApparencePerles sphères blanches
Taille des particules (μm)45 ~ 165
MatriceSeplife 6FF
Débit (cm / h)<750
Pression (MPa)0.3
Résistance à la chaleur121 ℃, dans l'eau pendant 30 minutes
stabilité du pH4 ~ 13 (long terme), 3 ~ 14 (court terme, CIP)
ApplicationProtéines, acides nucléiques et peptides en aval
de la biopharmacie et de la bio-ingénierie
Stabilité chimiqueStable dans les liquides suivants: tous les tampons aqueux courants;
1 mol / L d'hydroxyde de sodium; 8 mol / L d'urée; 8 mol / L de chlorhydrate de guanidine; 70% d'éthanol
Adsorption (mg / ml)> 55 mg / ml de lysozyme / ml
Capacité d'échange d'ions0,18 ~ 0,25 mmol / ml
Temp de travail.4 ~ 40 ℃
Conditions d'essai: Colonne de chromatographie 16 mm * 300 mm; Hauteur du lit à colonnes 15 cm; température 25 ℃;
la phase mobile était de 0,1 mol / L de NaCl.


Instruction de test:
1. emballage de colonne
L'emballage est effectué conformément aux procédures d'exploitation standard. Il faut s'assurer que chaque matériau est à la température de fonctionnement et que le gel doit être dégazé avant d'être emballé.
2. équilibre
Équilibrez la colonne avec 2 à 5 volumes de colonne de la balance de chargement, en vous assurant que la conductivité et le pH de l'effluent sont exactement les mêmes que la conductivité et le pH du tampon de chargement.
La solution d'équilibre est une solution tampon à faible concentration telle que NaOAC, PBS, etc. Une solution d'équilibre couramment utilisée est un tampon acétate 0,1 mol / L, pH 5,0.
3. chargement de l'échantillon
(1) L'échantillon est préparé avec une solution d'équilibrage, et l'échantillon trouble est centrifugé et filtré pour le chargement. Les échantillons contenant trop de sel sont traités puis distribués.
(2) En général, le produit cible est combiné sur une colonne, les impuretés sont éliminées par lavage avec une solution d'équilibre et un éluant est sélectionné pour laver le produit cible.
(3) La mesure dans laquelle le milieu adsorbe les composants de l'échantillon dépend de la nature chargée de l'échantillon, de la force ionique de la phase mobile et du pH. La concentration en sel est faible et le milieu s'adsorbe plus fermement aux composants de l'échantillon. Lors de l'utilisation d'un support de chromatographie SP, le pH recommandé est de 1 unité au-dessus du point isoélectrique du produit cible.
4. élution
L'élution peut être effectuée en augmentant la concentration en sel ou en augmentant le pH, et en augmentant généralement la concentration en sel. Un éluant couramment utilisé (solution B) tel que: 0,1 mol / L de tampon acétate + 2 mol / L de NaCl, pH 5,0.
5. régénération
Généralement, le tampon est lavé avec une concentration élevée en sel (contenant 1 ~ 2mol / L de NaCl) ou le pH est réduit de 10 fois ou plus, puis lavé avec une solution d'équilibre de la protéine liée pour équilibrer.
Si les protéines ou les lipides inactivés ne sont pas lavés pendant la régénération, ils peuvent être éliminés par nettoyage en place (CIP).
6.CIP
(1) Pour les protéines liées par liaison ionique, il peut être éliminé avec 0,5 à 1 volume de lit de colonne de 2 M. NaCl.
(2) Pour les protéines précipitées, les protéines liées de manière hydrophobe ou les lipides, il peut être lavé d'abord avec 1 volume de lit de colonne de 0,1 M NaOH, puis avec une solution tampon d'équilibre jusqu'à ce que le pH soit neutre.
(3) Pour les protéines, lipides, etc. fortement liés de manière hydrophobe, laver avec 4 à 10 fois le volume du lit d'éthanol à 70% ou d'isopropanol à 30%. A noter que la concentration du solvant organique augmente progressivement de manière dégradée, sinon il est facile de créer des bulles.
7. stockage
Scellé et stocké à 4 ~ 30 ℃ (la solution de conservation est 20% d'éthanol + 0,2mol / L d'acétate de sodium), endroit sec, ventilé et propre, ne peut pas être congelé;
La colonne utilisée est stockée à 4 ~ 8 ℃, solution d'éthanol à 20% + 0,2mol / L d'acétate de sodium.


Mise en garde:
(1) Sélection de la colonne: Théoriquement, tant que la colonne est suffisamment longue, la résolution idéale peut être obtenue, mais comme le débit de la colonne est lié au gradient de pression, la longueur de la colonne augmente pour ralentir le débit, le pic devient plus large, et la résolution Diminuer; le diamètre de la colonne augmente, entraînant une augmentation de la non-uniformité du débit de liquide et une diminution significative de la résolution.
(2) Le pH et la force ionique du tampon d'élution doivent être strictement contrôlés pendant le processus de purification. La chromatographie sur colonne doit être effectuée après l'échantillon et le milieu de chromatographie SP doit être soigneusement équilibré avec le tampon d'élution.
(3) Le lit de la colonne doit être plat, sans rainures ni bulles d'air, sinon il doit être reconditionné.
(4) Le débit doit être strictement contrôlé pendant le processus d'élution, et pas trop rapide.
(5) Le volume de l'échantillon doit être petit et la concentration ne doit pas être trop élevée.
(6) Pendant le chargement et tout le processus d'élution, la surface du cylindre ne peut pas sécher.





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