Résine de chromatographie d'agarose
Sp Seplife FF
SP SEPLIFE® FF Agarose Chromatographie Profil de produit en résine:
Sp Seplife® FF Chromatographie en résine est un nouveau lien hautement réticulé Résine de chromatographie d'agarose développé indépendamment par Sunresin. C'est une sorte de propyl à base d'acide sulfonique lié Chromatographie de filtration sur gel d'agarose résine. Solide chromatographie d'échange de cations Avec un débit élevé, une faible pression de dos, une charge dynamique élevée, une bonne stabilité chimique et des propriétés mécaniques, une faible adsorption non spécifique, un taux de récupération élevé, une échelle pratique, un raccourcissement du temps de production et une amélioration de la productivité. Il est largement utilisé dans séparation d'échange d'ions des protéines, acides nucléiques et peptides en aval biopharmaceuticals et bio-ingénierie.
SP SEPLIFE® FF Agarose Chromatographie Paramètres de résine:
| Code de résine | Sp Seplife® FF |
| Apparence | Perles de sphère blanche |
| Taille des particules (μm) | 45 ～ 165 |
| Matrice | Seplife 6ff |
| Débit (cm / h) | <750 |
| Pression (MPA) | 0.3 |
| Résistance à la chaleur | 121 ℃, dans l'eau pendant 30 minutes |
| stabilité du pH | 4 ~ 13 (à long terme), 3 ~ 14 (court terme, CIP) |
| Application | Protéines, acides nucléiques et peptides en aval
des biopharmaceutiques et de la bio-ingénierie |
| Stabilité chimique | ÉTABLE dans les liquides suivants: tous les tampons aqueux communs;
1 mol / L d'hydroxyde de sodium; 8 mol / L urée; Chlorhydrate de guanidine 8 mol / L; 70% d'éthanol |
| Adsorption (mg / ml) | > 55 mg / ml de lysozyme / ml |
| Capacité d'échange d'ions | 0,18 ～ 0,25 mmol / ml |
| Temp. | 4 ~ 40 ℃ |
Conditions de test: Colonne de chromatographie 16 mm * 300 mm; Hauteur de lit de colonne 15 cm; température 25 ℃;
La phase mobile était de 0,1 mol / L NaCl. |
Sp Seplife® FF Agarose Chromatographie Résine Instruction de test:
1. Emballage de colonne
L'emballage est effectué conformément aux procédures opérationnelles standard. Il faut s'assurer que chaque matériau est à la température de fonctionnement et que le gel doit être dégazé avant d'être emballé.
2. Equilibre
Équilibrez la colonne avec des volumes de 2 à 5 colonnes de l'équilibre de charge, en vous assurant que la conductivité et le pH de l'effluent sont exactement les mêmes que la conductivité et le pH du tampon de chargement.
La solution d'équilibre est une solution tampon à faible concentration telle que NaOAC, PBS, etc. Une solution d'équilibre couramment utilisée est de 0,1 mol / L de tampon d'acétate, pH 5.0.
3. Échantillon de chargement
(1) L'échantillon est préparé avec une solution d'équilibre et l'échantillon trouble est centrifugé et filtré pour le chargement. Des échantillons avec trop de concentration en sel sont traités puis distribués.
(2) En général, le produit cible est combiné sur une colonne, les impuretés sont emportées avec une solution d'équilibre et un éluant est sélectionné pour laver le produit cible.
(3) La mesure dans laquelle le milieu adsorbe les composants de l'échantillon dépend de la nature chargée de l'échantillon, de la force ionique de la phase mobile et du pH. La concentration en sel est petite et le milieu s'adsorbe plus fermement les composants de l'échantillon. Lorsque vous utilisez des supports de chromatographie SP, le pH recommandé est 1 unité au-dessus du point isoélectrique du produit cible.
4. Élution
L'élution peut être effectuée en augmentant la concentration de sel ou en augmentant le pH, et en augmentant généralement la concentration de sel. Un éluant couramment utilisé (solution b) tel que: 0,1 mol / L de tampon d'acétate + 2 mol / L NaCl, pH 5.0.
5.
Généralement, le tampon est lavé avec une concentration élevée en sel (contenant 1 ~ 2 mol / L de NaCl) ou le pH est réduit de 10 fois ou plus, puis lavé avec une solution d'équilibre de la protéine liée à l'équilibre.
Si les protéines ou les lipides inactivés ne sont pas lavés pendant la régénération, ils peuvent être éliminés par nettoyage sur place (CIP).
6. CIP
(1) Pour les protéines liées par la liaison ionique, il peut être éliminé avec un volume de lit de 0,5 à 1 colonne de NaCl 2 M.
(2) Pour les protéines précipitées, les protéines ou les lipides liés hydrophobiquement, il peut être lavé d'abord avec un volume de lit de colonne de NaOH 0,1 M, puis avec une solution de tampon d'équilibre jusqu'à ce que le pH soit neutre.
(3) Pour les protéines, les lipides, etc. fortement liés hydrophobes, lavez avec 4 à 10 fois le volume de lit de 70% d'éthanol ou 30% d'isopropanol. Notez que la concentration du solvant organique augmente progressivement de manière gradient, sinon il est facile de créer des bulles.
7.
Scellé et stocké à 4 ~ 30 ℃ (la solution de conservation est à 20% d'éthanol + 0,2 mol / L d'acétate de sodium), sec, ventilé, propre, ne peut pas être congelé;
La colonne utilisée est stockée à 4 ~ 8 ℃, une solution d'éthanol à 20% + 0,2 mol / L d'acétate de sodium.
Sp Seplife® FF Agarose Chromatographie Résine Avertir:
(1) Sélection de la colonne: théoriquement, tant que la colonne est suffisamment longue, la résolution idéale peut être obtenue, mais comme le débit de colonne est lié au gradient de pression, la longueur de la colonne augmente pour ralentir le débit, le pic devient plus large, et la résolution diminue; Le diamètre de la colonne augmente, provoquant une augmentation de la non-uniformité de l'écoulement liquide et une diminution significative de la résolution.
(2) Le pH et la force ionique du tampon d'élution doivent être strictement contrôlés pendant le processus de purification. La chromatographie sur colonne doit être effectuée après l'échantillon et le milieu de chromatographie SP doit être soigneusement équilibré avec le tampon d'élution.
(3) Le lit de colonne doit être plat, sans rainures et bulles d'air, sinon elle doit être reconditionnée.
(4) Le débit doit être strictement contrôlé pendant le processus d'élution, et pas trop rapidement.
(5) Le volume de l'échantillon doit être petit et la concentration ne doit pas être trop élevée.
(6) Pendant le chargement et l'ensemble du processus d'élution, la surface du cylindre est empêchée de sécher.
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